| 產(chǎn)品名稱 |
NCM460 |
| 商品貨號 |
MZ-0050 |
| 中文名稱 |
人結(jié)腸黏膜上皮細胞 |
| 組織來源 |
人結(jié)腸組織 |
| 形態(tài)特征 |
上皮細胞樣 |
| 生長特性 |
貼壁生長 |
| 特征特性 |
Moyer,MP,Manzano,LA,Merriman,RL等人在1995年10月3日公布(1996年6月發(fā)表)NCM460細胞的建立。源自一名西班牙裔68歲男性胃癌患者的正常結(jié)腸組織。表達結(jié)腸上皮細胞相關(guān)抗原，如細胞角蛋白和絨毛蛋白，但對與其他細胞類型相關(guān)的抗原(如神經(jīng)或內(nèi)皮細胞)呈陰性。一些細胞對粘蛋白合成呈陽性，通過使用特殊染色劑或抗體的標準染色方法確定，群體倍增時間約為32-38小時。初步表征表明它具有正常的生長特征并且不致瘤.初步表征表明NCM460細胞不在軟瓊脂中生長，并且不會產(chǎn)生腫瘤(Moyer等，1996)。 最近主要由INCELL合作者完成的研究表明，NCM460細胞系和選定的亞群在軟瓊脂中生長的能力不同，顯示出異常的核型并且可能是致瘤性的。這些測定中使用的確切條件和細胞密度在研究組之間不一致。然而，我們目前的解釋是，作為體外選擇的結(jié)果，細胞系表達了轉(zhuǎn)化的表型，但保留了正常結(jié)腸上皮細胞的許多功能 方面。個別研究人員應(yīng)評估這些信息和實驗數(shù)據(jù)是否適合在他們的個人研究或應(yīng)用中使用。 |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養(yǎng)條件 |
RPMI-1640培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%;雙抗，1%。 |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復(fù)蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
| 凍存條件 |
凍存液一般為90%FBS+10%DMSO或70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配 |
