大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)介紹：大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6) 是由Benda 等用N-nitrosomethylurea 誘導(dǎo)的大鼠膠質(zhì)瘤克隆，并經(jīng)過一系列的體外培養(yǎng)和動(dòng)物傳代交替后建成的。當(dāng)細(xì)胞從低密度生長到滿瓶時(shí)，S-100 產(chǎn)量增加10 倍。

大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)特性：

1） 來源：大鼠，膠質(zhì)瘤

2） 形態(tài)：成纖維細(xì)胞，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用T25 瓶充液發(fā)送活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，請(qǐng)先在顯微鏡下檢查細(xì)胞生長狀態(tài)，并將T25 瓶置于培養(yǎng)箱約6h 或過夜后，再次檢查細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，可按照以下細(xì)胞培養(yǎng)步驟進(jìn)行細(xì)胞后續(xù)處理操作。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)用途：僅供科研使用。

大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備F12K 培養(yǎng)基(F12K，SIGMA,貨號(hào)N3520，添加NaHCO3 2.5g/L)，82.5%；馬血清，15%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，2.5%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?span lang="EN-US">細(xì)胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細(xì)胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。