細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中需要每天進(jìn)行常規(guī)檢查和顯微鏡觀察，及時(shí)了解細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、數(shù)量改變、細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞有無(wú)移動(dòng)、有無(wú)污染、培養(yǎng)液pH是否變酸、變黃是否更換等。細(xì)胞常規(guī)檢查觀察的內(nèi)容為：
一、肉眼觀察
一般常規(guī)檢查用肉眼即可觀察，主要看培養(yǎng)液的顏色和透明度的變化。正常情況下，培養(yǎng)液pH介于7.2～7.4之間，呈桃紅色清亮透明。加入細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中置一般溫箱培養(yǎng)時(shí)，隨著細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞代謝產(chǎn)生的酸性產(chǎn)物會(huì)使培養(yǎng)液pH值下降，引起顏色變淺變黃。在超越緩沖范圍后培養(yǎng)液酸化變黃，如不及時(shí)調(diào)節(jié)pH，會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)，甚至造成細(xì)胞退變死亡。所以，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變黃，應(yīng)及時(shí)換液傳代。一般更換培養(yǎng)液的時(shí)間，依營(yíng)養(yǎng)物的消耗而定，正常情況生長(zhǎng)穩(wěn)定的細(xì)胞2～3天換液一次，生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞3～4天換液一次。培養(yǎng)液中加Hepes或用5%CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持穩(wěn)定，利于細(xì)胞生長(zhǎng)。用含磷酸鹽緩沖系統(tǒng)培養(yǎng)時(shí)，可因瓶及塞子漏氣，CO2溢出，也可能由于培養(yǎng)瓶塞洗刷不潔、殘留堿性物，使培養(yǎng)液變堿發(fā)紅，只致使細(xì)胞難以生長(zhǎng)，甚至死亡。細(xì)胞換液傳代后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液很快變黃，要注意是否有細(xì)菌污染或培養(yǎng)器皿沒(méi)有洗干凈。貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)若出現(xiàn)混濁，多為污染。懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，應(yīng)將瓶豎起靜置1小時(shí)，若培養(yǎng)基混濁示為污染，也可在顯微鏡下仔細(xì)觀察有無(wú)污染現(xiàn)象出現(xiàn)。
二、顯微鏡觀察
生長(zhǎng)良好的細(xì)胞，在顯微鏡下可觀察到細(xì)胞透明度大，折光性強(qiáng)，輪廓不清。相差顯微鏡觀察時(shí)可見細(xì)胞部分細(xì)微結(jié)構(gòu)。若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不良，可見細(xì)胞輪廓增強(qiáng)，細(xì)胞折光性變?nèi)酰?xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物質(zhì)，細(xì)胞之間空隙增大，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，甚至失去原有細(xì)胞的特點(diǎn)，產(chǎn)生圓縮脫落，有時(shí)細(xì)胞表面及周圍出現(xiàn)絲絮狀物。若細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良狀況沒(méi)有得到及時(shí)糾正，進(jìn)一步發(fā)展可見到部分細(xì)胞死亡，崩解漂浮在培養(yǎng)液中。發(fā)現(xiàn)這種情況應(yīng)及時(shí)處理，只有生長(zhǎng)良好的細(xì)胞才能進(jìn)行傳代培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)研究。
三、細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，經(jīng)初代培養(yǎng)或傳代培養(yǎng)，都有一長(zhǎng)短不同的潛伏期，在培養(yǎng)過(guò)程中注意觀察細(xì)胞增殖生長(zhǎng)的狀態(tài)極為重要。各種細(xì)胞增殖的時(shí)間不盡一致。傳代細(xì)胞系，胚胎組織或幼體細(xì)胞潛伏期短，一般在接種培養(yǎng)第二天即可見細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，3～4天便可連接成片。成體組織的潛伏期長(zhǎng)，老年組織和癌組織潛伏期更長(zhǎng)，可達(dá)一周左右。原代細(xì)胞培養(yǎng)中最先可見從組織塊中邊緣“長(zhǎng)出”細(xì)胞，這種細(xì)胞是從原代組織塊中游走出來(lái)的，并不是細(xì)胞增殖產(chǎn)生。這種早期游出的細(xì)胞多以成纖維細(xì)胞為主，其易生長(zhǎng)，適應(yīng)性強(qiáng)，呈放射狀或旋渦狀分布，很快生長(zhǎng)并互相連接成網(wǎng)狀。傳代細(xì)胞在傳代后，一般經(jīng)過(guò)懸浮、貼壁伸展很快進(jìn)入潛伏期，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞大量繁殖，逐漸相連成片而長(zhǎng)滿瓶底。一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底80%就應(yīng)及時(shí)傳代，否則會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)甚至脫落。懸浮細(xì)胞當(dāng)發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)顯著、密度增大、分布稠密、培養(yǎng)液變黃時(shí)也應(yīng)及時(shí)傳代。
四、微生物污染
細(xì)胞接種、傳代、換液加藥后應(yīng)經(jīng)常觀察，密切注意是否有微生物污染發(fā)生。一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液混濁、液體內(nèi)漂浮著菌絲或細(xì)菌，或生長(zhǎng)明顯變緩，胞質(zhì)內(nèi)顆粒增多，有中毒表現(xiàn)等應(yīng)懷疑是否有微生物污染，進(jìn)一步觀察檢查并及時(shí)處理。
