肉毒梭菌菌落形態(tài)：類圓形，邊緣不整，直徑大約3毫米。菌落突出平板表面，灰白色，表面一般比較光滑也有的呈顆粒狀，菌落底部及周圍形成甘油二酯的沉淀乳濁環(huán)。如果平板表面濕潤則菌落界線不明顯，向外擴散，常常擴散成菌苔。也可形成絨毛網(wǎng)狀菌落。血瓊脂平板，血液具有降低氧化還原電位的作用，能促進肉毒梭菌的生長。菌落周圍出現(xiàn)大而透明的溶血環(huán)（除G型） 。
最嚴(yán)格的厭氧菌 ：常溫催化除氧式或焦性沒石子酸除氧式。
生長最適溫度：28 ～37 酸堿度：pH為6.8—7.6，產(chǎn)毒的最適pH為7.8 ~8.2
產(chǎn)毒培養(yǎng)溫度：各型菌產(chǎn)毒的最適培養(yǎng)溫度不完全相同。C、D型溫度高些為宜，35 培養(yǎng)3d即可，而E型菌低溫度長時間培養(yǎng)效果較好， 25 培養(yǎng)7~10d。為兼顧其它型，統(tǒng)一采用30培養(yǎng) 5 ~10d ， pH7.8 。
菌株分離培養(yǎng)溫度：35 48h ， pH為7.5 。
對營養(yǎng)要求不高 ：在普通培養(yǎng)基上都能生長。
增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基：即適于肉毒梭菌發(fā)芽、繁殖，又適于產(chǎn)生毒素（庖肉培養(yǎng)基）。呈均勻混蝕生長，肉渣可被A、B和F型菌消化，并發(fā)黑，產(chǎn)生腐敗惡臭味，產(chǎn)生大量氣體。
分離鑒定培養(yǎng)基：卵黃瓊脂平板是較好的培養(yǎng)基，由于肉毒梭菌（除G型）產(chǎn)生脂肪酶，分解卵黃中的脂肪，在卵黃瓊脂平板上形成的菌落及其周圍培養(yǎng)基表面在斜光照射下可見到虹彩薄層，此現(xiàn)象，除A型諾氏梭菌及生孢梭菌外，屬于肉毒梭菌所特有，有一定的鑒別作用。
